凍存液302-14681的細(xì)胞凍存步驟和凍存細(xì)胞復(fù)蘇步驟

　　1、常規(guī)方法收集對(duì)數(shù)期的貼壁細(xì)胞或者懸浮細(xì)胞于試管中。

 

　　2、根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的密度和凍存管的大小確定所需凍存的細(xì)胞數(shù)。

 

　　3、將所需數(shù)目的細(xì)胞懸浮液置于離心管中，收集培養(yǎng)細(xì)胞沉淀，棄去離心管中的上清液。

 

　　4、加入適量的本凍存液于離心管中。輕柔地混勻細(xì)胞，制成細(xì)胞混合液。

 

　　5、將離心管中的細(xì)胞混合液分裝于已標(biāo)記的凍存管中。

 

　　6、直接將分裝好的細(xì)胞凍存管置于溫冰箱中，可長(zhǎng)期保存。

 

　　7、若需液氮長(zhǎng)期保存，需先置其中至少一天后方可轉(zhuǎn)至液氮罐中。

 

　　凍存液302-14681的凍存細(xì)胞復(fù)蘇步驟：

　　1、從冰箱中取出凍存的細(xì)胞，立即置于水浴槽中快速解凍。

 

　　2、待凍存管中的細(xì)胞混合液*融化后，立即加入細(xì)胞培養(yǎng)基于凍存管中與細(xì)胞混合，將其中的混合液移至含有該細(xì)胞培養(yǎng)基的離心管中，收集凍存細(xì)胞沉淀，移去上清液（注意勿將細(xì)胞沉淀倒掉）。

 

　　3、加入適量的新鮮培養(yǎng)基，使用移液管緩緩加入細(xì)胞沉淀中，輕柔混勻，將混勻好的細(xì)胞移至事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)容器中。

 

　　4、鏡檢觀察，待細(xì)胞狀態(tài)恢復(fù)后可進(jìn)行其他研究或者培養(yǎng)處理。

 

　　凍存液302-14681的注意事項(xiàng)：

　　需在超凈臺(tái)內(nèi)使用，以避免雜菌污染。

 

　　需和細(xì)菌混勻，否則細(xì)菌凍存液無(wú)法起到在低溫冷凍條件下對(duì)細(xì)菌的保護(hù)作用。

 

　　對(duì)數(shù)期細(xì)菌凍存效果，但非對(duì)數(shù)期的或不是新鮮培養(yǎng)的細(xì)菌也可以用本細(xì)菌凍存液冷凍保存。